MICROSCOPIA Y CULTIVO IN VITRO 

MICROSCOPIA DE CAMPO CLARO(OPTICO).- Los componentes básicos de los microscopios ópticos son una fuente de luz que se utiliza para iluminar la muestra colocada en una platina, un condensador para enfocar la luz en la muestra y dos sistemas de lentes (lente del objetivo y lente del ocular) que se utilizan para ampliar la imagen de la muestra. En la microscopia de campo claro la muestra se ve mediante transiluminación, de manera que la luz procedente del condensador atraviesa la muestra. Después se amplía la imagen, primero por la lente del objetivo y después por la lente del ocular. La ampliación total de la imagen es el producto de las ampliaciones de las lentes del objetivo y del ocular. Habitualmente se utilizan tres lentes del objetivo diferentes: bajo aumento (aumento de 10 veces), que se puede utilizar para explorar una muestra; alto aumento en seco (40 veces), que se utiliza para buscar microorganismos grandes como parásitos y hongos filamentosos; e inmersión en aceite (100 veces), que se utiliza para observar bacterias, levaduras (fase unicelular de los hongos) y los detalles morfológicos de los microorganismos y las células de mayor tamaño.

-MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO.- En los microscopios de campo oscuro se utilizan las mismas lentes del objetivo y del ocular que en los microscopios de campo claro; sin embargo, se utiliza un condensador  que impide que la luz transmitida ilumine directamente la muestra. Solo la luz oblicua y dispersa llega a la muestra y atraviesa los sistemas de las lentes, lo que hace

que la muestra esté muy iluminada sobre un fondo negro.

 La ventaja de este método es que la capacidad de resolución de la microscopia de campo oscuro es significativamente mayor que la de la microscopia de campo claro , lo que posibilita la detección de bacterias muy delgadas. La desventaja de este método es que la luz pasa alrededor de los microorganismos y no los atraviesa, lo que dificulta el estudio de su estructura interna.

MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE.-La microscopia de contraste de fases permite examinar los detalles internos de los microorganismos. En esta forma de microscopia, como se hacen pasar haces de luz paralelos a través de objetos de densidades diferentes, la longitud de onda de un haz se ''desfas'' en relación con el otro haz de luz. Mediante el uso de anillos anulares en el condensador y en las lentes del objetivo se amplifican las diferencias de fases, de modo que la luz en fase parece más brillante que la luz fuera de fase. Esto crea una imagen tridimensional del microorganismo o de la muestra y permite un análisis más detallado de las estructuras internas.

MICROSCOPIO FLUORESCENTE.-

La microscopia fluorescente tiñe a los microorganismos con colorantes fluorescentes, y después su estudio con un microscopio fluorescente de diseño especial. 

Se utiliza una serie de filtros para bloquear el calor que genera la lámpara, eliminar la luz infrarroja y seleccionar la longitud de onda adecuada para excitar el fluorocromo. Posteriormente la luz que emite el fluorocromo se amplifica con las lentes del objetivo y del ocular tradicionales. Los microorganismos y las muestras teñidos con fluorocromos aparecen brillantes sobre un fondo oscuro, aunque los colores varían dependiendo del fluorocromo seleccionado.

MICROSCOPIO ELECTRONICO.-

A comparacion de otros microscopios , en los microscopios electrónicos se utilizan bobinas magnéticas  para dirigir un haz de electrones desde un filamento de tungsteno a través de una muestra y hacia una pantalla. Dado que la longitud de onda en este caso es mucho más corta que la de la luz, la resolución y la ampliación mejoran drásticamente. Con microscopia electrónica se pueden ver partículas víricas individuales. Las muestras habitualmente se tiñen o se recubren con iones metálicos para crear contraste

CULTIVO IN VITRO

Consiste en tomar una porción de una planta (ej. el ápice, una hoja o segmento de ella, segmento de tallo, meristemo, embrión, nudo, semilla, antera, etc.) y colocarla en un medio nutritivo estéril (usualmente gelificado, semisólido) donde se regenerará una o muchas plantas.

MEDIOS DE CULTIVO NO SELECTIVOS ENRQUECIDOS

Estos medios están diseñados para permitir el crecimiento de la mayoría de los gérmenes

que no necesitan unas condiciones exigentes. Los siguientes medios son algunos de los

más empleados:

Agar sangre. Los laboratorios clínicos utilizan muchos tipos de medios de cultivo agar

sangre. Los medios contienen dos componentes fundamentales: un medio basal

(EJ: soja tripticasa, infusión de cerebro-corazón, base de Brucella) y sangre (de

oveja, caballo, conejo). Se pueden añadir varios suplementos más para ampliar el

número de gérmenes que se pueden cultivar en estos medios de cultivo.

Agar chocolate. Se trata de un agar modificado. Cuando se añade sangre o hemoglobina

al medio de base calentado se vuelve marrón (de ahí su nombre). Este medio permite

el crecimiento de la mayoría de las bacterias, incluidas algunas que no crecen en el

agar sangre como la Haemophilus y algunas cepas de Neisseria patógenas.

Agar Mueller-Hinton. Se trata de un medio recomendado para estudios convencionales

de sensibilidad bacteriana a antibióticos. Su composición está bien definida e incluye

extractos de ternera y caseína, sales, cationes divalentes y almidón soluble necesario

para que los resultados sean reproducibles.

MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS Y DIFERENCIALES.- 

Los medios de cultivo selectivos se diseñan para poder recuperar gérmenes específicos

que pueden estar presentes en una mezcla de otros gérmenes (EJ:, un patógeno

entérico en las heces). 

Agar MacConkey. Se trata de un agar selectivo para las bacterias gramnegativas y

diferencial para distinguir las bacterias que fermentan la lactosa y las que no.

 Este medio incluye peptonas digeridas, sales biliares, lactosa, rojo neutro y cristal violeta.

Las sales biliares y el cristal violeta inhiben las bacterias grampositivas. Las bacterias

que fermentan la lactosa producen ácidos, que precipitan las sales biliares y provocan

un color rojo del indicador rojo neutro.

Agar sal manitol. Se trata de un medio de cultivo selectivo empleado para el aislamiento

de estafilococos. El medio incluye extractos de caseína y tejidos animales digeridos,

extracto de ternera, manitol, sales y rojo fenol. Los estafilococos pueden crecer en

presencia de una elevada concentración de sal y S. aureus puede fermentar el manitol,

lo que produce colonias de color amarillo en este agar.

Agar de Lowenstein-Jensen (LJ). Este medio, utilizado para aislar micobacterias,

contiene glicerol, harina de patata, sales y huevos coagulados. Se añade verde malaquita para inhibir las bacterias grampositivas.

Agar Middlebrook. Este medio de cultivo de agar se emplea también para aislar micobacterias.